產(chǎn)品名稱:Ethidium Homodimer-1 (EthD-1)
產(chǎn)品特點:Ethidium Homodimer-1 (EthD-1)的相關產(chǎn)品:Des(Desmin 0.5mgDes(Desmin) 結蛋白抗原ALPI Protein Human 重組人 Alkaline Phosphatase / ALPI 蛋白 (His 標簽)TNFRSF13C重組大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 蛋白 (His 標簽) Protein
產(chǎn)品型號:
更新日期:2024-11-19
訪問次數(shù):32
Ethidium Homodimer-1 (EthD-1)的詳細資料:
產(chǎn)品僅供研究使用,不適用于人類或臨床診斷
商品屬性:
產(chǎn)品英文名稱:Ethidium Homodimer-1 (EthD-1)
產(chǎn)品中文名稱:Ethidium Homodimer-1 (EthD-1)
規(guī)格:1 mg/10 mg
貨號:EY-01X8564
用途:僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
• λEx/λEm: 528/617 nm(結合DNA), 493 nm(未結合DNA) 。
保存建議:4℃,避光保存 12 個月。
運輸條件:藍冰運輸
背景
Ethidium Homodimer-1是一種高親和性的熒光核酸染料,與DNA或RNA結合后,可以使熒光增強30多倍。由于帶有較強正電荷,所以該染料不能穿過細胞膜進行活細胞染色,但是可以準確的檢測溶液中的核酸或者解體細胞中的核酸,是一種較靈敏的核酸染色劑。
本產(chǎn)品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷??芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品:
ADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質素受體(抗原 0.5mgADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質素受體(抗原)
IL1B Protein Human 重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標簽)
CDNF重組小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白 Protein
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豚鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)檢測試劑盒 ,英文名: MIF ELISA Kit
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MonkeyIerleukin1,IL-1ELISAKit白介素1(IL-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝
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RabbitIerleukin9,IL-9ELISAKit兔子白介素9(IL-9)檢測試劑盒規(guī)格:96T/48T
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乳酸(LD)測試盒(測血清、組織等) Lactic acid (LD) test case (serum, tissue, etc.)
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小鼠氧還原蛋白過氧化物酶4(PRDX4)檢測試劑盒
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Human5-lipoxygenase,5-LO/LOXELISAKit 人5脂加氧酶(5-LO/LOX)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitfor15-LO/LOX(Mouse15-lipoxygenase)ELISAKit小鼠15脂加氧酶
飲料比色法定量檢測試劑盒20次
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CDK2AP2重組人 CDK2AP2 蛋白 Protein
IL1B Protein Human 重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標簽)
F11R Protein Rat 重組大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標簽)
操作步驟:
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質粒的表達菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
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