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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit

產(chǎn)品中文名稱：雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒

規(guī)格：100T/1000T

貨號(hào)：EY-01X8545
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

• 發(fā)光強(qiáng)度高。

• 檢測(cè)靈敏度高，測(cè)定樣品的線性范圍寬。

• 操作便捷，讀值穩(wěn)定，速度快。

• 對(duì)各種培養(yǎng)基兼容性強(qiáng)。

保存建議:-20℃，避光保存12個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）可以催化螢火蟲螢光素（Luciferin）生成氧化螢光素（Oxyluciferin），在螢光素被氧化的過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)。在氧氣存在的條件下，海腎螢光素酶（Renilla luciferase）可以催化腔腸素（Coelenterazine）氧化成腸酰胺（Coelenteramide），在腔腸素氧化的過(guò)程中也會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

AATK peptide 細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)酪激酶抗原 0.5mgAATK peptide 細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)酪激酶抗原

IFNL1 Protein Human 重組人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白

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COLEC12 Protein Rat 重組大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白

CXCL10重組人 CXCL10 / Crg-2 蛋白 Protein

豌豆凝集素(PSA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat cardiac anscription factor GATA4 大鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4

Humanai-insulieceptoraibody,AIRAELISAKit 人抗胰島素受體抗體(AIRA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCreatineKinaseMBisoenzyme,CK-MB檢測(cè)試劑盒人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織C-TAK激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

HumanProstaticAcidPhosphatase，PAPELISAKit人前列腺酸性0酸酶(PAP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

肽酶抑制因子3   英文名稱：   Human Peptidase Inhibitor 3   規(guī)格：      英文縮寫：   PI-3

過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體γ   英文名稱：   Human Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   規(guī)格：      英文縮寫：   PPARγ

0酸化SMAD2/3抗體   英文名稱：   Human Phosphor Mothers Against Decapeaplegic Homolog 2/3 aib動(dòng)?動(dòng)

大鼠聚集蛋白聚糖(AGC)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： AGC ELISA Kit

Monkey Vascuoar endothelial cell growth factor receptor -3 (VEGFR-3) ELISA Kit血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-3(VEGFR-3)檢測(cè)試劑盒

RatterminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit 大鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCCC5b-9)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFree-T3ELISAKit大鼠游離三甲狀腺原

細(xì)胞活力藍(lán)色熒光檢測(cè)試劑盒50次

RatPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit大鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒APOA1重組小鼠 ApoA1 蛋白 Protein

蛋白二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)重組蛋白 Recombinant Protein Disulfide Isomerase (PDI)

RPRD1B重組人 RPRD1B 蛋白 Protein

IFNL1 Protein Human 重組人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白

SELL Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白