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本公司代理ATCC細胞，提供Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；231-Cas9-546保存售前售后一條龍服務，若要獲取詳細的說明書或價格信息，點擊了解更多腫瘤細胞。

細胞名稱  Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；231-Cas9-546保存
形態(tài)特性 上皮樣

生長特性 貼壁生長

特征特性 該細胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；400ug/ml G418

傳代方法 1:2~1:4傳代；每周2~3次。

傳代情況 C3

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

細胞培養(yǎng)步驟：
一．Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；231-Cas9-546保存培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
注意事項：
1.收到Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；231-Cas9-546保存后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)絡。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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100克Phenylalanine Deaminase Medium苯瓊脂培養(yǎng)基

250克Pseudomonas Agar P假單胞P瓊脂

250克Pseudomonas Agar F假單胞F瓊脂

10克Dulcitol Semisolid Agar衛(wèi)矛醇半固體瓊脂

250克NO.4 Agar Base號瓊脂

250克Wagstsuma Agar Base我妻氏血瓊脂培養(yǎng)基基礎

250克L Nac1 Peptone Water60%/L氯化鈉蛋白胨肉湯

250克42℃ Growth Medium42℃生長培養(yǎng)基

TG  兔抗甲狀腺球蛋白   規(guī)格 0.1ml*

TFR2/Transferrin Receptor 2  轉鐵蛋白受體2抗體   規(guī)格 0.2ml*

TFPI-2  組織因子途徑抑制劑-2抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFPI/LACI  組織因子途徑抑制劑抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFF3  三葉肽因子3抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFF2  三葉肽因子2抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFF1/BCEI  癌雌激素誘導蛋白抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFEB  T淋巴細胞轉錄調(diào)節(jié)因子TFEB抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFE3  轉錄因子E3   規(guī)格 0.1ml*

TFDP3  轉錄因子DP3抗體（肝癌相關抗原661）   規(guī)格 0.2ml*

TFDP2/DP2  轉錄因子E2F二聚體蛋白2抗體   規(guī)格 0.2ml*

TFCP2C  轉錄因子CP2抗體   規(guī)格 0.2ml*
Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；231-Cas9-546保存Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的小鼠抗大鼠IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse anti-rat IgG ascites  小鼠抗大鼠IgG腹水   規(guī)格 1ml*

Mouse Anti-rat IgG  小鼠抗大鼠IgG   規(guī)格 1mg*

Mouse Anti-Rabbit IgM/RBITC  羅丹明標記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-CY5  PE-CY5標記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE  PE標記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/HRP  辣根過氧化物酶標記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/Gold  膠體金標記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 2ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/FITC  FITC標記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；231-Cas9-546保存在運輸?shù)倪^程中，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，因此客戶在收到貨以后的*時間是要先觀察產(chǎn)品的狀況，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要立即打開培養(yǎng)瓶，應立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱過夜，并于次日在顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁。如果發(fā)現(xiàn)細胞仍不能貼壁，請試著用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理；如若證實細胞無活力，請在收到貨后48小時內(nèi)將細胞狀態(tài)反饋給我公司，我們將盡快幫助解決。