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1.室內(nèi)質(zhì)量控制(室內(nèi)質(zhì)控)
ELISA試劑盒定性試驗的臨床意義在于是否檢出病原體,與檢出量無關(guān),因此質(zhì)量控制(quality control, QC)要保證試驗的靈敏度和重復(fù)性。目前定性實驗的質(zhì)控規(guī)則還還存在爭議,目前有以下幾種比較流行的理論:
(1)Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法 Levey-Jennings質(zhì)控圖以及Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法zui早應(yīng)用于生化檢測的質(zhì)量控制,在ELISA檢測中仍為探索階段,一般認為:①一 次超出3SD;②連續(xù)二次超出2SD;③3~5次連續(xù)處于一側(cè)的2SD之內(nèi);④5~7次連續(xù)偏向橫軸的一側(cè),均為失控。目前多采用一次超過2SD作為“告警”,一次超出3SD為“失控”。
另外還有Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則、累積和(CUSUM)質(zhì)控規(guī)則等質(zhì)控方法。
(2)衛(wèi)生部臨床檢驗中心確定的質(zhì)控方法:
室內(nèi)質(zhì)控品:定性測定的室內(nèi)質(zhì)控品,除了試劑盒附帶的陰陽性對照外,實驗室還應(yīng)該選擇至少2個室內(nèi)質(zhì)控品,其中一個為弱陽性質(zhì)控品,接近Cutoff值,S/Co值應(yīng)該為2~4之間;另一個為陰性質(zhì)控品。定量測定則至少要求一個水平的質(zhì)控品。
測定頻度:每臺儀器,每次檢測患者樣本時至少測定一次室內(nèi)質(zhì)控品;ELISA測定每塊板都要測定室內(nèi)質(zhì)控品。
質(zhì)控圖繪制:定性測定可采用弱陽性質(zhì)控品的S/Co值作質(zhì)控圖。定量測定參照臨床化學(xué)的繪制方法。質(zhì)控判斷規(guī)則:定性測定為弱陽性的質(zhì)控品不能測定為陰性;陰性質(zhì)控品不能測定為陽性。重復(fù)性的判斷規(guī)則為12S(警告限),13S為失控限。定量測定參照臨床化學(xué)的判斷規(guī)則。
(3)室內(nèi)質(zhì)控品
室內(nèi)質(zhì)控品的穩(wěn)定以及合適的濃度是運用一切質(zhì)控規(guī)則的前提??蛇x擇S/CO值減去精密度測定中得到的三倍批間CV%(通常的ELISA試劑盒測定批間變異(CV%)在15%左右)與該S/CO值的乘積(意即三倍SD)仍大于1的質(zhì)控血清作監(jiān)測重復(fù)性的室內(nèi)質(zhì)控品用。 計算公式:S/CO(1-3CV%)=S/CO-3SD。同時選擇S/CO處于1.5左右的質(zhì)控血清以判斷每次測定時試劑盒測定下限的有效性。
(4) “即刻性”質(zhì)控
一些實驗室不是每天進行ELISA項目的檢驗,而ELISA試劑盒部分試劑盒效期短 ,用同一批號試劑盒連續(xù)常規(guī)測20次,難度較大。采用"即刻法"質(zhì)控統(tǒng)計方法,只需連續(xù)測3次,即可對第3次檢驗結(jié)果進行質(zhì)控。①先將測定值從小到大排列,X1zui小,Xnzui大 ;②計算X和s;③計算SI上限值和下限值。SI上=(Xzui小-X)/S,SI下=(Xzui大-X)/S;④對照SI表,檢查是否出控。SI上、下限≤規(guī)定值,在控; SI上或下限>規(guī)定值,失控。
⑸室內(nèi)質(zhì)控的現(xiàn)狀及應(yīng)對措施
免疫質(zhì)控品制作困難,不管是自制血清或者購于其它機構(gòu),其穩(wěn)定性和濃度很難達到要求,加之ELISA影響因素較多,失控后很難找到確切的原因。因此如何開展ELISA試劑盒室內(nèi)質(zhì)控一直困擾著臨床檢測者?;诖?,不同實驗室采取了不同的應(yīng)對措施,舉例如下:①選擇衛(wèi)生部臨床檢驗中心(NCCL)的低值質(zhì)控血清作為室內(nèi)質(zhì)控品,儲備量以3個月,采用一次超過2SD作為“告警”,一次超出3SD為“失控”的質(zhì)控規(guī)則,(但該法對于HBeAb(4NCU/ml)、 HBcAb(2NCU/ml)檢測不適用,因為即使質(zhì)控在控,其結(jié)果也可能為陰性);②由于質(zhì)控品不穩(wěn)定,每個月需重新設(shè)立靶值 ,并根據(jù)常規(guī)CV設(shè)定SD(SD= ×CV¯);③陰陽性對照正常,室內(nèi)弱陽性和陰性質(zhì)控正常,且沒有出現(xiàn)“花板”(洗板不干凈,背景顏色深)的情況下認為該檢測批有效,但仍需對位于“灰區(qū)”和弱陽性的HBsAg、HBeAg結(jié)果及少見模式結(jié)果進行復(fù)查,避免偶然因素及孔間差對結(jié)果造成影響;④若陰陽性對照、陰性質(zhì)控異常,或出現(xiàn)“花板”的情況則必須整批復(fù)查;⑤在陰陽性對照、陰性質(zhì)控正常且未出現(xiàn)“花板”的情況下,弱陽性質(zhì)控S/Co超出-3SD時復(fù)查位于“灰區(qū)”標本,超出+3SD時則復(fù)查弱陽性標本;⑥對于抗體檢測,尤其是競爭法檢測HBeAb、HbcAb,由于不同試劑盒、不同檢測方法間CO值存在差異及變異系數(shù)大等因素,結(jié)果缺乏可比性,失控后的處理很難滿意地解決,在沒有統(tǒng)一的判斷標準、較小的變異系數(shù)及明確的臨床意義的情況下,引入弱陽性報告方式在臨床實踐中證明可行;⑦室內(nèi)質(zhì)控的評價:認真分析每一次室內(nèi)質(zhì)控失控的原因,并對各項檢測的均值,CV等進行月與月之間的比較分析,及時發(fā)現(xiàn)試劑盒檢出能力的變化及操作中存在的問題,并采取適當?shù)拇胧﹣硖岣邫z測的性。
2.室間質(zhì)量評價(室間質(zhì)評)
室間質(zhì)評是一種回顧性評價,主要是控制實驗結(jié)果的準確性,也是某些定量實驗量值的溯源。作為臨床實驗室應(yīng)當積極參與各級室間質(zhì)評計劃,其要點是保證同病人標本一樣對待室間質(zhì)評物。必須強調(diào)的是室間質(zhì)量評價結(jié)果必須同室內(nèi)質(zhì)控一并分析,查找原因以期改進工作中的不足,同時指導(dǎo)實驗室選擇合適的試劑盒。