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    霉菌是發(fā)酵工業(yè)產(chǎn)品的重要菌種，特別是抗生素和酶制劑。霉菌雜交育種是利用霉菌的準性生殖過程中的基因重組和分離現(xiàn)象，將不同菌株的優(yōu)良特性集合到一個新菌株中去，從中篩選出具有高產(chǎn)和優(yōu)良特性的新菌株。ELISA試劑盒

1.異核體的形成

(1)直接親本的選擇 用來進行雜交的兩個野生型菌株叫原始親本，它們在基本培養(yǎng)基上能夠形成豐富的孢子，并且具有較強的重組性能。原始親本經(jīng)過誘變以后得到各種突變型菌株，假設(shè)這種菌株是用來作為形成異核體的親本，就叫直接親本。直接親本形態(tài)上必須穩(wěn)定，其原始菌株還要攜帶明顯營養(yǎng)標記和輔助標記等生理特性，如營養(yǎng)缺陷型、耐藥性、產(chǎn)量特性等，目前應(yīng)用普遍的是營養(yǎng)缺陷型菌株。

(2)異核體的形成異核體是由兩種不同基因型的菌絲細胞融合產(chǎn)生的，只有具有交醞型的菌株才能形成異核體。由兩個含有不同營養(yǎng)缺陷型標記的直接親本經(jīng)細胞融合形成的異核體由于已經(jīng)進行了質(zhì)配，因此異核體在生長過程中具有了親本細胞各自缺陷的營養(yǎng)生長能力，這就是營養(yǎng)互補作用，使得異核體能在基本培養(yǎng)基上生長。異核體形成的過程是要將兩個直接親本菌株的分生孢子或菌絲體進行混合接種、培養(yǎng)，使兩個配對菌株的細胞彼此接觸，進而促進細胞壁融合和細胞質(zhì)交流，產(chǎn)生異核體。主要方法有*培養(yǎng)基混合法、基本培養(yǎng)基銜接法和有限培養(yǎng)基培養(yǎng)法。

①*培養(yǎng)基混合法將配對菌株的孢子混合接種在液體*培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待長出幼嫩菌絲后，用生理鹽水洗滌離心數(shù)次，除去黏附的培養(yǎng)基，把菌絲撕碎，并涂布于基本培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，直至長出異核體的菌絲叢，挑取其上的孢子移到基本培養(yǎng)基舒面上保存。此法特別適合于兩個直接親本的分生孢子不易融合的情況。ELISA試劑盒

    另一種*培養(yǎng)基混合法是把兩個直接親本的分生孢子混合接種于*培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)5～8天后，形成為數(shù)很少的異核體，進一步純化分離，可以獲得異核體的單個菌落，移接到基本培養(yǎng)基上保存。

②基本培養(yǎng)基銜接法取兩個親本菌株新鮮斜面上的分生孢子，用生理鹽水洗滌數(shù)次，制成高濃度的孢子懸浮液，分別從上至下和從下至上涂接到基本培養(yǎng)斜面上，接種長度約為斜面的2／3，而兩菌株接種的銜接部分約為1／3。培養(yǎng)后，銜接部分長出異核體菌絲叢。進一步考證、純化，移人斜面保存。該法獲得異核體頻率很高。

③有限培養(yǎng)基培養(yǎng)法有限培養(yǎng)基(LM)是由*培養(yǎng)基和基本培養(yǎng)基以1：9比例組成。有限培養(yǎng)基培養(yǎng)法可分為液體靜止培養(yǎng)法和固體平板培養(yǎng)法兩種。液體靜止法是在液體有限培養(yǎng)基中接入兩個配對菌株的分生孢子，培養(yǎng)l～2天后，將長出的幼嫩菌絲撕碎，涂布于基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)6～8天，將長出的異核體菌絲叢移人斜面保存。固體平板培養(yǎng)法是將兩個配對菌株的分生孢子等量混合制成孢子懸浮液，涂布到有限培養(yǎng)基瓊脂平板上，培養(yǎng)6～8天后，在兩個親本菌落間形成異核體菌絲叢。

(3)異核體的檢出 在進行異核體檢出時尤其要排除由親本互養(yǎng)產(chǎn)生的菌落。所謂互養(yǎng)是指，有時兩個不同營養(yǎng)缺陷的親本菌株在基本培養(yǎng)基上生長時．由于彼此十分靠近，盡管沒有發(fā)生細胞融合，但產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物通過培養(yǎng)基的滲透可以互為對方所利用，彌補各自的營養(yǎng)缺陷，從而可以在基本培養(yǎng)基上生長。由于發(fā)生互養(yǎng)現(xiàn)象的親本菌株間并沒有發(fā)生遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)移，因而可以在接下來的篩選中排除，篩選出真正的異核體。主要方法有：①把以上異核體菌絲叢中的菌絲，單*條一條地挑取，置于基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)，凡是能重新形成菌落的，即為異核體，這種方法可以排除互養(yǎng)菌株。②把異核體菌落上的大量分生孢子涂布在基本培養(yǎng)基上．如能形成為數(shù)不多的雜合二倍體菌落，則為真正的異核體，否則就不是異核體；或者將異核體菌落培養(yǎng)到一定時間，在*的異核體孢子顏色的菌落上，出現(xiàn)類似野生型孢子顏色角變或斑變的雜臺二倍體，說明菌落確是由異核體形成的。ELISA試劑盒

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